穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株
貨號：C10000
是一種經(jīng)過特定基因修飾的細胞株，可根據(jù)實驗所需表達外源基因、進行基因敲除、敲入、以及精確改變基因序列（如點突變）。對比一般瞬轉(zhuǎn)方法，利用細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株開展實驗能夠獲得長期而穩(wěn)定的特定性狀，因此有助于增強實驗的可重復性。

穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株

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穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株構(gòu)建

外源基因在細胞中的表達可分為兩大類，一類是瞬時表達，一類是穩(wěn)定表達。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，雖然可以達到高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細胞染色體上，使宿主細胞可*表達目的基因。建立穩(wěn)定細胞株，一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物對靶細胞進行篩選。抗性標記基因有潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）和嘌呤霉素（puromycin），Hygromycin B、G418和puromycin進行選擇性篩選。傳統(tǒng)的穩(wěn)定株篩選方法需要通過外源基因的瞬時轉(zhuǎn)染后對靶細胞進行篩選， 終獲得從單一細胞擴增起來的穩(wěn)定細胞株， 該方法陽性率低，周期長，工作量大。慢病毒是一種RNA病毒，攜帶的外源基因在病毒感染細胞后需要逆轉(zhuǎn)錄為DNA，再整合到宿主細胞基因組以后才能表達。 利用慢病毒必須整合到宿主基因組的特性來篩選穩(wěn)定株的方法克服了傳統(tǒng)方法的弊端，可以在短時間內(nèi)獲得高效率的穩(wěn)定細胞株。篩選得到的細胞或者可穩(wěn)定表達目的蛋白，用于蛋白的擴增和富集；或者得到穩(wěn)定沉默特定基因的細胞株

1.需客戶告知目的基因具體信息，確定穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系的類型

2.提供相關(guān)的實驗圖片、實驗數(shù)據(jù)、構(gòu)建完成的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系

3.周期 價格更多詳細內(nèi)容請聯(lián)系客服

穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株

貨號：C10000

是一種經(jīng)過特定基因修飾的細胞株，可根據(jù)實驗所需表達外源基因、進行基因敲除、敲入、以及精確改變基因序列（如點突變）。對比一般瞬轉(zhuǎn)方法，利用細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株開展實驗能夠獲得長期而穩(wěn)定的特定性狀，因此有助于增強實驗的可重復性。細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株除了可用于基因調(diào)控研究，也非常適合于長周期的藥物篩選和藥理學研究、重組蛋白和抗通過慢病毒系統(tǒng)或轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)將外源基因表達框穩(wěn)定整合進靶細胞基因組，實現(xiàn)外源基因在靶細胞的長期穩(wěn)定表達。對比瞬轉(zhuǎn)方法，構(gòu)建過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)株可避免瞬轉(zhuǎn)中因轉(zhuǎn)染效率導致的表達效率不一致的問題。構(gòu)建好的細胞株中的外源基因不會因為細胞傳代而丟失，可以持續(xù)表達特定的基因或ncRNA序列用以基因功能研究，重復實驗時不需要對細胞重新轉(zhuǎn)染質(zhì)粒，大為節(jié)省了實驗時間。體生產(chǎn)等實驗。載體家憑借其資源完備的載體定制平臺，通過病毒轉(zhuǎn)導常規(guī)腫瘤細胞的方式可構(gòu)建多種應用類型的細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株。

　　構(gòu)建CRISPR基因編輯細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株是當今研究基因和細胞功能關(guān)系的流行工具。通過gRNA引導Cas9靶向靶細胞基因組特定序列的CRISPR基因編輯，如基因敲除、敲入和定點突變，可以從DNA水平修飾靶細胞的基因序列。載體家提供兩種gRNA表達模式，第一種是轉(zhuǎn)導gRNA/Cas9共表達載體，gRNA和Cas9在細胞株中同時表達。第二種是構(gòu)建Cas9表達穩(wěn)轉(zhuǎn)株，再根據(jù)實驗需求導入gRNA表達載體。使用單Cas9表達穩(wěn)轉(zhuǎn)株可以獲得更大的實驗靈活性，如導入多個gRNA打靶GOI，或者多個gRNA與多種Cas9（野生型Cas9, Cas9n, dCas9等）之間進行搭配等。

　　CRISPR基因編輯系統(tǒng)可選擇單gRNA或雙gRNA表達方式。雙gRNA表達載體常用于以下需要兩個gRNA同時打靶的場景：1）雙gRNA引導兩個Cas9 nickase分別打靶靶位點的正反義DNA鏈，形成DSB并獲得比單gRNA更特異的打靶效果；2）通過在形成兩個DSB，實現(xiàn)目標序列的大片段刪除；3）同時打靶兩個不同的基因。雙gRNA表達載體由兩個U6啟動子驅(qū)動gRNA的表達。

　　載體家CRISPR基因編輯載體可采用多類方式進行轉(zhuǎn)導靶細胞。除基因敲入和定點突變常用的gRNA瞬轉(zhuǎn)Cas9穩(wěn)轉(zhuǎn)株的方法外，我們還提供慢病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒、PiggyBac轉(zhuǎn)座子載體等多種外源基因轉(zhuǎn)導方式，以滿足體外或體內(nèi)多樣CRISPR基因編輯實驗需求。

　　采用Tet-on系統(tǒng)進行誘導表達目的基因，雖然可以直接進行質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)，但是載體家亦提供該類載體的慢病毒包裝以構(gòu)建相關(guān)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株。構(gòu)建好的Tet-On系統(tǒng)細胞株同時表達tTS和rtTA兩種轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,而目的基因的表達可受四環(huán)素調(diào)控。其中tTS在四環(huán)素不存在的情況下會結(jié)合目的基因的上游TRE啟動子，抑制目的基因表達。在細胞體系中添加四環(huán)素或其類似物后，rtTA進行響應并結(jié)合TRE啟動子，激活目的基因表達。

　　shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)株一般使用慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒在靶細胞基因組中導入shRNA表達框，實現(xiàn)shRNA在細胞系中的長期穩(wěn)定表達。不同于siRNA瞬轉(zhuǎn)，shRNA穩(wěn)轉(zhuǎn)株可內(nèi)源性地穩(wěn)定表達siRNA效果，不受轉(zhuǎn)染效率影響，從而獲得更穩(wěn)定的基因敲低效果。