pLKO.1-EGFP-Puro基因沉默質(zhì)粒
啟動(dòng)子U6
復(fù)制子pUC
原核抗性Amp
真核抗性Puro
克隆菌株Stbl3
培養(yǎng)條件37℃
表達(dá)宿主哺乳細(xì)胞
質(zhì)粒宿主哺乳細(xì)胞,慢病毒
質(zhì)粒用途基因沉默
片段類型shRNA
原核抗性氨芐青霉素
真核抗性嘌呤霉素

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注意事項(xiàng)：轉(zhuǎn)化前請(qǐng)準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒相應(yīng)的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態(tài)名稱和培養(yǎng)溫度。
1、收到質(zhì)粒干粉后請(qǐng)先5000rpm離心1min，再加入20μl~50μl無(wú)菌水或 pH8.0 的 1*TE緩沖液來(lái)溶解質(zhì)粒，室溫放置1min；

2、從-80℃冰箱中取出相應(yīng)的感受態(tài)，置于冰盒上解凍，并做好標(biāo)記；

3、取2μl質(zhì)粒加至100μl感受態(tài)中，冰浴30min；

4、42℃熱激90s，再冰浴2min；

5、加入900μl無(wú)抗的LB液體培養(yǎng)基，180rpm震蕩培養(yǎng)45min；

6、6000rpm離心5min，僅留100ul上清混勻菌體沉淀；

7、混勻后的菌液加至對(duì)應(yīng)抗性的LB平板上，倒入適量玻璃珠，涂勻液體；

8、將平板正向培養(yǎng)1h，再倒置培養(yǎng)12h~16h；

9、挑取單克隆菌落至對(duì)應(yīng)抗性的LB液體培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng)12h~16h，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要提取質(zhì)粒

pCDH-CMV-MCS-EF1-Hygro蛋白表達(dá)質(zhì)粒

pLKO.1-EGFP-Puro基因沉默質(zhì)粒

pLVX-TetOne-Puro蛋白表達(dá),誘導(dǎo)質(zhì)粒

pLVML-3×FLAG-MCS-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒

pCDH-CMV-MCS-EF1-turboRFP-T2A-Puro蛋白表達(dá)質(zhì)粒

pDC316-ZsGreen1-shRNA基因沉默質(zhì)粒

041 pLVPTH2-tTR-KRAB-Cerulean基因沉默質(zhì)粒

pSIH1-H1-copGFP-T2A-Puro基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-EGFP(2A)Puro基因沉默質(zhì)粒

pLVX-shRNA2基因沉默質(zhì)粒

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