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一、載體構(gòu)建的基本實(shí)驗(yàn)步驟
(1)目的DNA片段和載體的制備；
(2)目的DNA片段和載體的連接；
(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化；
(4)克隆篩選。
(5)測序驗(yàn)證及結(jié)果交付
二、詳細(xì)內(nèi)容
1、以PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建，如大腸桿菌表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體；報(bào)告基因載體等；
2、基因定點(diǎn)突變，包括單點(diǎn)突變，多點(diǎn)突變，基因缺失等；
3、載體元件替換和改造；
4、siRNA載體和miRNA表達(dá)載體構(gòu)建；
5、過表達(dá)載體構(gòu)建。
| pTRV2基因沉默質(zhì)粒 |
| pTRV2-Gateway基因沉默質(zhì)粒 |
| pFGC5941基因沉默質(zhì)粒 |
| AtU6-26-sgRNA-SK基因編輯質(zhì)粒 |
| pCAMBIA35s-4×Myc-MCS-3×FLAG蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pCAMBIA1305.1蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pCAMBIA1303蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pCAMBIA1301-35SN蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pCAMBIA1300蛋白表達(dá)質(zhì)粒 |
| pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-Usp7-m-shRNA2基因沉默質(zhì)粒 |
| pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-Usp7-m-shRNA1基因沉默質(zhì)粒 |
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