蛋白表達質粒的一些常識性知識分享

　　1.嚴緊型質粒

　　當細菌染色體復制一次時，質粒也復制一次，每個細菌內只含1-2個質粒；

　　2.松弛型質粒

　　當細菌染色體復制停止后仍然能繼續(xù)復制，每一個細菌內一般含20個左右質粒拷貝。這些質粒的復制是在寄主的松弛控制之下的，每個細菌中含有10-200份拷貝，如果用一定的藥物處理抑制寄主蛋白質的合成還可使質粒拷貝數(shù)增至幾千份。

　　質粒的擴增會占用大量資源，當載體用于表達或者其他用途時，也會使用上低拷貝質粒。

　　質粒的接合轉移是細菌遺傳物質轉移的一個重要方式。在質粒轉移過程中，供體菌和受體菌通過結合作用緊密接觸，質粒從供體細胞向受體轉移，同時進行質粒復制。按能否自主轉移，可以將天然存在的質粒分為轉移型質粒和非轉移型質粒兩大類。

　　這里要注意獲得質粒的細菌可隨之而獲得一些生物學特性，如耐藥性或產生細菌素的能力等。從環(huán)境友好出發(fā)，實驗室里的廢棄菌液，一定要滅過菌才能倒哦。

　　穿梭質粒是指一類人工構建的具有兩種不同復制起點和篩選，因而可以在兩種不同類群宿主中存活和復制的質粒載體。此概念不僅用于不同的微生物菌群之間，也可推廣到真核生物表達載體的構建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳動物表達載體pMT2和用于植物細胞的Ti質粒。這些穿梭質粒不僅可以在大腸桿菌中復制擴增，也可以在相應的枯草、酵母、動物或植物細胞中擴增和表達。這樣利于對質粒的分子生物學操作和大量制備。